解密4種定量測試方法，你知道哪種？

定量測試方法主要應用于藥物、食品、化工等行業(yè)，用于定量測定某一特定物質或多種物質。在選擇物質定量分析方案時，需要考慮多種關鍵因素，如樣品體系、目標物的性質、樣品矩陣、靈敏度和檢出限、準確度和精密度、分析速度和成本，操作難度等。以上因素眾多，故選擇合適的定量分析方法尤其重要。

定量是指利用檢測器的響應信號（色譜，光譜峰面積或峰高）與待測組分的量（質量或濃度）成正比定量。

有機目標物定量可按照下圖選擇定量方案：

儀器方案定好后，為了定量更準確，還需要選擇一種或多種適合目標化合物定量分析的方法，在實際操作中，最好對比不同方法的優(yōu)缺點，并根據實驗結果進行調整和優(yōu)化。

常見的定量分析方法有：歸一化法、外標法、內標法、標準加入法等。

一、 歸一化法

將所有出峰組分的含量之和按100%計的定量方法，稱為面積歸一法。

歸一法使用時需要滿足三個條件

1、樣品中所有組分都能從色譜柱流出

2、所有組分都能被檢測器檢出

3、能測定或查出所有組分相對校正因子

各組分含量的計算公式如下：

式中：C：含量    F：校正因子   A：表示峰面積

若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，當樣品中組分是同分異構體或同系物，Fi都很相近。

在計算時通常采用公式如下：

案例1 ： 當樣品主成分含量大于50%面積歸一定量結果如下圖

圖2 丙酮GC-FID純度分析

外標法又稱標準曲線法。取待測組分的純物質配成一系列不同濃度的標準溶液進行色譜分析，繪制峰面積與標樣含量的標準工作曲線，并擬合二者的線性方程式。

在計算時通常采用公式如下：

案例2：目標物標準品，用外標法定量時結果如下圖

圖3 測樣品中對二甲苯的準確含量，上圖為標準曲線

目前微譜已經積累的成熟外標定量方法見表1

表1 化合物外標法定量典型案例表

選擇適宜的純物質作為內標物，準確稱量后加入待測樣品中，根據組分和內標峰面積的比值以及內標加入量進行定量。

在計算時通常采用公式如下：

標準加入法又稱疊加法，實際是一種特殊的內標法。以待測組分的純物質為內標物，加入到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定加入內標物前后待測組分的峰面積，從而計算待測組分的含量。

在計算時通常采用公式如下：

標準加入法每一個樣品都要配制三個以上的、含樣品溶液和標準溶液的混合溶液，因此，這種方法不適于大批樣品的分析。在難以找到合適內標物時，可作為內標法的一種延伸。

定量分析要求目標組分都必須分離，能被檢測器檢測到，并且濃度在檢測器的線性范圍內，不同方法適用于不同要求。

圖5 定量方法選擇導圖